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無菌接種步驟

無菌接種步驟

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1.將初步洗滌及切割的材料放入燒杯,帶入超凈臺上,用消毒劑滅菌,再用無菌水沖洗,然后瀝去水分,取出放置在滅過菌的紗布上或濾紙上。2.材料吸干后,一手拿鑷子、一手拿剪刀或解剖刀,對材料進行適當?shù)那懈?。如葉片切成0.5cm平方的小塊;莖切成含有一個節(jié)的小段。微莖尖要剝成只含1~2片幼葉的莖尖大小等...

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詳細介紹

  1.將初步洗滌及切割的材料放入燒杯,帶入超凈臺上,用消毒劑滅菌,再用無菌水沖洗,然后瀝去水分,取出放置在滅過菌的紗布上或濾紙上。

  2.材料吸干后,一手拿鑷子、一手拿剪刀或解剖刀,對材料進行適當?shù)那懈?。如葉片切成0.5cm平方的小塊;莖切成含有一個節(jié)的小段。微莖尖要剝成只含1~2片幼葉的莖尖大小等。在接種過程中要經(jīng)常灼燒接種器械,防止交叉污染。

  3.用灼燒消毒過的器械將切割好的外植體插植或放置到培養(yǎng)基上。具體操作過程(以試管為例)是:先解開包口紙,將試管幾乎水平拿著,使試管口靠近酒精燈火焰,并將管口在火焰上方轉(zhuǎn)動,使管口里外灼燒數(shù)秒鐘。若用棉塞蓋口,可先在管口外面灼燒,去掉棉塞,再燒管口里面。然后用鑷子夾取一塊切好的外植體送入試管內(nèi),輕輕插入培養(yǎng)基上。若是葉片直接附在培養(yǎng)基上,以放1~3塊為宜。至于材料放置方法除莖尖、莖段要正放外,其他尚無統(tǒng)一要求。接種完后,將管口在火焰上再灼燒數(shù)秒種。并用棉塞,塞好后,包上包口紙,包口紙里面也要過火。

  褐化

  解決方案:在培養(yǎng)基中添加活性碳可以防止植物組織自身的酚類物質(zhì)排泌和變褐老化,對形態(tài)發(fā)生和器官形成有良好作用。一般認為,活性碳主要吸附非極性物質(zhì)及色素大分子,可以減少一些有害物質(zhì)的影響,但是具體吸附的選擇性很差,溫度低時吸附力增強,溫度高時吸附力減弱,甚至?xí)馕?,通常使用濃度?.5-10g/L。加入活性炭后使培養(yǎng)基變黑,對一些植物誘導(dǎo)生根有利。大量活性炭的加入會削弱瓊脂的凝固能力,因此要多加些瓊脂。很細的活性炭容易沉淀,因此通常在瓊脂將要凝固時,需輕輕搖動培養(yǎng)瓶。

  酚污染

  解決方案:植物外植體組織在接種時的切割面會溢泌一些酚類物質(zhì),在接觸空氣中的氧氣后,其會氧化為相應(yīng)的醌類物質(zhì),產(chǎn)生可見的茶色、褐色或黑色,此即謂“酚污染”。在木本植物,尤其是熱帶木本植物及少量草本植物中,此現(xiàn)象較為嚴重。

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